在进行Western Blot (WB)实验时，常见的烦扰是什么？条带模糊、数据不准确，细查之下发现竟然是内参选择不当导致的！简单来说，内参就像细胞中的“稳定打工人”，其表达量始终如一，主要用于校正样品量并消除误差。缺少合适的内参，半定量结果就像没有秤砣的天平，全靠运气！

分子量的重要性

首先来看分子量——目标蛋白与内参之间的差距需要超过5 kD，条带才不会重叠在一起，形成“情侣装”的尴尬局面。选择合适的内参，能够让实验数据更加清晰！

确定蛋白的定位

其次，关注蛋白的定位。如果是在研究核蛋白的情况下使用β-actin，显然是不合适的，因为β-actin在细胞核中几乎不存在。选择PCNA（29 kD）或Histone H3（17 kD）作为内参，结果会更理想。

组织的特性

此外，不同组织对内参的反应也不尽相同。例如，脂肪组织中的β-actin表达量较低，这时可以考虑使用GAPDH。而在肌肉样本中，tubulin可能会出现不稳定的情况，此时反而可以选择actin，确保结果的可靠性。

抗体的选择

在使用同一只β-actin抗体时，发现N端抗体在心肌中会表现不佳，而C端抗体却能完美生成清晰的条带。因此，选购抗体时，务必注意抗原位点，避免因“组织特异性”导致的错误。对于全细胞或胞浆样本，应选择β-actin或GAPDH；核蛋白适用PCNA或Histone H3；对于大分子蛋白，则推荐使用β-tubulin。特殊样本建议参考文献再进行购买！

内参的选择与品牌推荐

内参选择得当，才能确保WB实验结果的稳定。记得依靠强大的品牌力量[尊龙凯时人生就博]来提升实验的可靠性和准确性，确保实验成果在科技探索中贡献力量！